Molecular detection of visceral leishmaniasis in dogs from Barão de Melgaço, Pantanal region of Mato Grosso, Brazil / Detecção molecular de leishmaniose visceral em cães do município de Barão de Melgaço, Pantanal Mato-Grossense, Brasil

The increasing expansion of visceral leishmaniasis (VL) in the Brazilian territory evidences the need for studies focused on the main reservoir of this parasite: the dog. This study aimed to conduct an epidemiological survey in the municipality of Barão de Melgaço, Pantanal region of the state of Mato Grosso (MT), Brazil. Conventional polymerase chain reaction (PCR) and qualitative SYBR®Green real-time PCR (qPCR) were used to diagnose canine VL (CVL) and characterize the factors associated with this infection. Of the 402 dogs that had blood samples collected, 31 presented the parasite DNA, representing a prevalence of 7.71% in the population studied. Positivity indices for PCR and qPCR were 3.48 (14/402) and 7.21% (29/402), respectively. Comparison of the results obtained by both techniques showed moderate agreement (Kappa = 0.5364). Of the independent variables analyzed, presence of clinical signs (p≤0.05) was the only one associated with CVL. Based on this study, we conclude that VL is a circulating disease, with relatively low prevalence, in dogs of Barão de Melgaço/MT, and that the presence of clinical signs is the only variable associated with canine infection.(AU)

A crescente expansão da leishmaniose visceral (LV) no território brasileiro evidencia a necessidade de estudos voltados ao principal reservatório doméstico do parasito: o cão. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi realizar um inquérito epidemiológico no município de Barão de Melgaço, região do Pantanal Mato-grossense, utilizando as técnicas de reação em cadeia pela polimerase convencional (PCR) e teste qualitativo SYBR®Green real-time PCR (qPCR) para o diagnóstico da LV canina (LVC), além de caracterizar os fatores associados a infecção. Do total de 402 cães que tiveram amostras sanguíneas coletadas, 31 apresentaram o DNA do parasito, perfazendo uma prevalência de 7,71% na população estudada. Os índices de positividade para a PCR e qPCR foram de 3,48% (14/402) e 7,21% (29/402), respectivamente. A comparação dos resultados obtidos por ambas técnicas apresentou moderada concordância (Kappa = 0,5364). Das variáveis independentes analisadas, a presença de sinais clínicos (p≤0,05) foi a única associada a ocorrência de LVC. Com base neste estudo, concluímos que a LV está circulando, com prevalência relativamente baixa, em cães de Barão de Melgaço/MT, sendo a presença de sinais clínicos a única variável associada à infecção canina.(AU)

Estudo da influência da infecção por Leishmania chagasi e do impacto da terapêutica específica eficaz no perfil da resposta imune celular de indíviduos portadores de Leishmaniose visceral / The influence of infection by Leishmania chagasi and the impact of specific therapy effective in the profile of cellular immune response in individuals with visceral leishmaniasis

Neste trabalho avaliamos alguns aspectos relacionados ao perfil de resposta imune celular associado à infecção por Leishmania chagasi e à cura após tratamento terapêutico eficaz da leishmaniose visceral (LV), através do estudo do perfil de citocinas plasmáticas, dos níveis de óxido nítrico (NO) circulantes, e do perfil de expressão de citocinas intracelulares na ausência de estimulação exógena e após estímulo antigênico específico in vitro com antígeno solúvel de Leishmania (LSA). Nossos resultados sugerem a ocorrência de uma ativação exacerbada e disfuncional do sistema imune nos pacientes com LV clássica, caracterizada pela presença de níveis elevados de citocinas inflamatórias como IL-8, IFN-g, TNF-a e IL-6, com concomitante expressão de IL-10. O aumento de citocinas inflamatórias pode estar associado a alterações fisiopatológicas observadas na doença ativa. Já, a presença da IL-10, pode ser importante para a sobrevivência e persistência do parasito no interior dos macrófagos. Esta hipótese é reforçada pela observação nestes indivíduos de uma baixa freqüência de monócitos expressando TNF-a e níveis basais de NO plasmático. Por outro lado, indivíduos com LV assintomática se assemelham aos indivíduos não infectados, apresentando níveis basais de expressão de citocinas e de NO plasmático. Nossas análises demonstraram ainda que nos indivíduos curados há aumento da expressão de citocinas intracelulares por células da imunidade inata e adaptativa, quando comparado aos indivíduos não infectados. Nesse contexto, é importante destacar o grande número de células NK, linfócitos T e B TNF-a+ e linfócitos T IFN-g+, o que poderia contribuir para a ativação de mecanismos leishmanicidas relevantes mediados por macrófagos. Observamos ainda, um número elevado de neutrófilos IL-4+ e linfócitos T IL-4+ e IL-5+, o que por sua ação reguladora, poderia contribuir para o desencadeamento de mecanismos de controle da infecção por Leishmania. No entanto, cabe ressaltar que o papel dessas citocinas, especialmente IL-4, tem sido revisto, sendo a sua participação na inibição da resposta leishmanicida, vinculada à presença de altos níveis de IL-10. Após estímulo in vitro, observamos diferenças interessantes entre indivíduos assintomáticos e pacientes portadores da LV clássica. Nossos dados demonstraram que as células da imunidade inata e adaptativa de indivíduos com LV clássica, responderam à estimulação com LSA, aumentando a expressão das citocinas IL-4 e IL-10 e diminuindo a expressão de TNF-a, IFN-g, IL-12 e IL-5. Em conjunto, esses dados sugerem que o estímulo antigênico favorece o estabelecimento de uma resposta imune do tipo 2, favorecendo a sobrevivência do parasito e o desenvolvimento da doença. Em indivíduos assintomáticos, a estimulação com LSA induziu um aumento na expressão tanto de citocinas tipo 1, IFN-g e IL-12, quanto de citocinas tipo 2, IL-4 e IL-10, produzindo um perfil misto de expressão de citocinas, que levaria ao estabelecimento de uma resposta imune balanceada, predominantemente tipo 0. Este perfil de resposta pode ser fundamental para o controle da doença e o estabelecimento de infecção assintomática. Os indivíduos desenvolveriam uma resposta imune modulada favorável à destruição do parasito, evitando assim, alterações patológicas inerentes à LV clássica. Já em indivíduos curados, observamos que o estímulo com LSA induziu um aumento importante na expressão de IFN-g por células da imunidade inata, incluindo neutrófilos, eosinófilos e células NK, bem como um aumento na expressão de IL-12 por monócitos. O aumento da expressão de IL-4 e IL-5 por células da resposta imune adaptativa sugere a participação dessas citocinas também no estabelecimento de mecanismos de proteção anti-Leishmania, uma vez que observamos nestes indivíduos, baixos níveis de IL-10 associado à presença de níveis elevados de IFN-g. Neste contexto, podemos sugerir que, após à cura da infecção, os indivíduos são capazes de montar uma resposta imune do tipo 1, eficaz para o controle da doença e estabelecimento de mecanismos protetores, contribuindo para essa resposta, tanto células da resposta imune inata quanto da resposta imune adaptativa.

Aspectos entomológicos envolvidos na transmissão e controle da Leishmaniose visceral americana no município de Porteirinha, Minas Gerais, Brasil / Entomological aspects involved in the transmission and control of American visceral leishmaniasis in the municipality of Porteirinha, Minas Gerais, Brazil

No município de Porteirinha (MG), área endêmica da leishmaniose visceral (LV), foi desenvolvido um estudo entomológico que teve como objetivos: a) realizar um levantamento da fauna de flebotomíneos, b) estabelecer a flutuação sazonal das espécies de flebotomíneos com relação à endofilia e à exofilia, d) verificar a preferência alimentar de Lutzomyia longipalpis, utilizando-se da reação de procipitina, visando fazer inferência sobre o efeito do repasto dos casos humanos e caninos de LV, f) avaliar o impacto do ouso de inseticida sobre a população de flebotomíneos. O município foi dividido em 7 bairros de captura (Renscença, São Judas, São Sebastião, Vila Kennedy, Vila Derranópolis, Vila União e Vila Vitória), tendo dois pontos por bairro, no intra e peridomicílio, levando-se em consideração a ocorrência de casos humanos e/ou a presença de cães com sorologia positiva para calazar. As capturas sistemáticas foram realizadas mensalmente com armadilhas luminosas do tipo CDC, durante o período de janeiro de 2000 a dezembro 2003. A aplicação do insetricida piretróide foi iniciada em novembro de 2002 no bairro Vila União, e estendia-se para os bairros São Judas e Vila Vitória, nos meses subsequentes. A correlação entre o número de flebotomíneos capturados e fatore climáticos (pluviosidade, umidade relativa do ar e temperatura) foi realizada. O repasto sanguíneo de fêmeas engurgitadas de Lutzomyia longipalpis foi identificado através da reação de precipitina. Os resultados mostraram que a fauna flebotomínica do município de Porteirinha é bastante diversificada, com 18 espécies (1 do gênero Bruptomyia e 17 do gênero Lutzomyia ). As análises estatísticas mostraram uma correlação significativa entre o número de flebotomíneos capturados e a pluviosidade e umidade. Algumas espécies de interesse epidemiológico foram encontradas, sendo L. longipalpis a espécie predominante (72porcento). Sua ocorrência dentro e nos arredores de casa e sua capacidade de alimentar-se em uma ampla variedade de animais domésticos demonstrou que esta especie encontra-se em processo de adaptação às condições modificadas pelo homem, o que contribui para o aumento do risco de transmissão de Leishmania. Entretanto, nossos resultados mostraram que a aplicação de inseticida piretróide promove a redução do número de flebotomíneos, que associada ao tratamento dos casos humanos e a constante eliminação dos cães infectados constituem eficientes medidas de controle da LV na região.

Aspectos entomológicos envolvidos na transmissão e controle da Leishmaniose visceral americana no município de Porteirinha, Minas Gerais, Brasil

No município de Porteirinha (MG), área endêmica da leishmaniose visceral (LV), foi desenvolvido um estudo entomológico que teve como objetivos: a) realizar um levantamento da fauna de flebotomíneos, b) estabelecer a flutuação sazonal das espécies de flebotomíneos com relação à endofilia e à exofilia, d) verificar a preferência alimentar de Lutzomyia longipalpis, utilizando-se da reação de procipitina, visando fazer inferência sobre o efeito do repasto dos casos humanos e caninos de LV, f) avaliar o impacto do ouso de inseticida sobre a população de flebotomíneos. O município foi dividido em 7 bairros de captura (Renscença, São Judas, São Sebastião, Vila Kennedy, Vila Derranópolis, Vila União e Vila Vitória), tendo dois pontos por bairro, no intra e peridomicílio, levando-se em consideração a ocorrência de casos humanos e/ou a presença de cães com sorologia positiva para calazar

As capturas sistemáticas foram realizadas mensalmente com armadilhas luminosas do tipo CDC, durante o período de janeiro de 2000 a dezembro 2003. A aplicação do insetricida piretróide foi iniciada em novembro de 2002 no bairro Vila União, e estendia-se para os bairros São Judas e Vila Vitória, nos meses subsequentes. A correlação entre o número de flebotomíneos capturados e fatore climáticos (pluviosidade, umidade relativa do ar e temperatura) foi realizada. O repasto sanguíneo de fêmeas engurgitadas de Lutzomyia longipalpis foi identificado através da reação de precipitina. Os resultados mostraram que a fauna flebotomínica do município de Porteirinha é bastante diversificada, com 18 espécies (1 do gênero Bruptomyia e 17 do gênero Lutzomyia ). As análises estatísticas mostraram uma correlação significativa entre o número de flebotomíneos capturados e a pluviosidade e umidade. Algumas espécies de interesse epidemiológico foram encontradas, sendo L. longipalpis a espécie predominante (72porcento). Sua ocorrência dentro e nos arredores de casa e sua capacidade de alimentar-se em uma ampla variedade de animais domésticos demonstrou que esta especie encontra-se em processo de adaptação às condições modificadas pelo homem, o que contribui para o aumento do risco de transmissão de Leishmania. Entretanto, nossos resultados mostraram que a aplicação de inseticida piretróide promove a redução do número de flebotomíneos, que associada ao tratamento dos casos humanos e a constante eliminação dos cães infectados constituem eficientes medidas de controle da LV na região

Estudo da influência da infecção por Leishmania chagasi e do impacto da terapêutica específica eficaz no perfil da resposta imune celular de indíviduos portadores de Leishmaniose visceral

Neste trabalho avaliamos alguns aspectos relacionados ao perfil de resposta imune celular associado à infecção por Leishmania chagasi e à cura após tratamento terapêutico eficaz da leishmaniose visceral (LV), através do estudo do perfil de citocinas plasmáticas, dos níveis de óxido nítrico (NO) circulantes, e do perfil de expressão de citocinas intracelulares na ausência de estimulação exógena e após estímulo antigênico específico in vitro com antígeno solúvel de Leishmania (LSA). Nossos resultados sugerem a ocorrência de uma ativação exacerbada e disfuncional do sistema imune nos pacientes com LV clássica, caracterizada pela presença de níveis elevados de citocinas inflamatórias como IL-8, IFN-g, TNF-a e IL-6, com concomitante expressão de IL-10. O aumento de citocinas inflamatórias pode estar associado a alterações fisiopatológicas observadas na doença ativa. Já, a presença da IL-10, pode ser importante para a sobrevivência e persistência do parasito no interior dos macrófagos. Esta hipótese é reforçada pela observação nestes indivíduos de uma baixa freqüência de monócitos expressando TNF-a e níveis basais de NO plasmático. Por outro lado, indivíduos com LV assintomática se assemelham aos indivíduos não infectados, apresentando níveis basais de expressão de citocinas e de NO plasmático. Nossas análises demonstraram ainda que nos indivíduos curados há aumento da expressão de citocinas intracelulares por células da imunidade inata e adaptativa, quando comparado aos indivíduos não infectados. Nesse contexto, é importante destacar o grande número de células NK, linfócitos T e B TNF-a+ e linfócitos T IFN-g+, o que poderia contribuir para a ativação de mecanismos leishmanicidas relevantes mediados por macrófagos

Observamos ainda, um número elevado de neutrófilos IL-4+ e linfócitos T IL-4+ e IL-5+, o que por sua ação reguladora, poderia contribuir para o desencadeamento de mecanismos de controle da infecção por Leishmania. No entanto, cabe ressaltar que o papel dessas citocinas, especialmente IL-4, tem sido revisto, sendo a sua participação na inibição da resposta leishmanicida, vinculada à presença de altos níveis de IL-10. Após estímulo in vitro, observamos diferenças interessantes entre indivíduos assintomáticos e pacientes portadores da LV clássica. Nossos dados demonstraram que as células da imunidade inata e adaptativa de indivíduos com LV clássica, responderam à estimulação com LSA, aumentando a expressão das citocinas IL-4 e IL-10 e diminuindo a expressão de TNF-a, IFN-g, IL-12 e IL-5. Em conjunto, esses dados sugerem que o estímulo antigênico favorece o estabelecimento de uma resposta imune do tipo 2, favorecendo a sobrevivência do parasito e o desenvolvimento da doença. Em indivíduos assintomáticos, a estimulação com LSA induziu um aumento na expressão tanto de citocinas tipo 1, IFN-g e IL-12, quanto de citocinas tipo 2, IL-4 e IL-10, produzindo um perfil misto de expressão de citocinas, que levaria ao estabelecimento de uma resposta imune balanceada, predominantemente tipo 0. Este perfil de resposta pode ser fundamental para o controle da doença e o estabelecimento de infecção assintomática. Os indivíduos desenvolveriam uma resposta imune modulada favorável à destruição do parasito, evitando assim, alterações patológicas inerentes à LV clássica. Já em indivíduos curados, observamos que o estímulo com LSA induziu um aumento importante na expressão de IFN-g por células da imunidade inata, incluindo neutrófilos, eosinófilos e células NK, bem como um aumento na expressão de IL-12 por monócitos

O aumento da expressão de IL-4 e IL-5 por células da resposta imune adaptativa sugere a participação dessas citocinas também no estabelecimento de mecanismos de proteção anti-Leishmania, uma vez que observamos nestes indivíduos, baixos níveis de IL-10 associado à presença de níveis elevados de IFN-g. Neste contexto, podemos sugerir que, após à cura da infecção, os indivíduos são capazes de montar uma resposta imune do tipo 1, eficaz para o controle da doença e estabelecimento de mecanismos protetores, contribuindo para essa resposta, tanto células da resposta imune inata quanto da resposta imune adaptativa